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| 內容簡介： |
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本专著以本实验室人员从中国西部地区传统发酵食品及婴儿、成人粪便中分离出的乳酸菌为供试菌株，以标准菌株Lactobacillus rhamnosus GG（ATCC 43121，USA）为阳性对照菌株，筛选出具有益生功能（包括黏附于肠上皮细胞能力、耐受模拟胃液和模拟肠液能力），又具有显著抑制人结肠癌HT-29细胞增殖能力的4株乳酸菌（M5、X11、X12和K14）。再经过抗癌功能筛选，最终获得菌株X12、M5的细胞壁能显著诱导HT-29细胞DNA损伤和凋亡，并深入探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的机理。
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| 關於作者： |
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王淑梅，女，1979年4月生人，中共党员。2005年7月到哈尔滨学院参加工作，现为哈尔滨学院食品工程学院教师，职称讲师，现主讲《食品营养学》、《乳品工艺学》、《食品安全预警》等食品专业课程。2001年、2005年分别获得东北农业大学学士学位和硕士学位，2014年获得哈尔滨工业大学工学博士学位，2015年6月至今在东北农业大学食品学院博士后流动站做博士后研究，2018年9月至今在美国伊利诺伊大学-香槟分校做学术交流访问。作者长期从事乳酸菌及其活性代谢产物研究及功能性益生菌的研发，是哈尔滨市级科研团队应用微生物团队成员。
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| 目錄：
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第一章结肠癌及乳酸菌功能关系概述
第一节引言
一、结肠癌简介
二、结肠癌发病症状
三、乳酸菌抑制结肠癌的可能途径
第二节人结肠癌的发病原因
一、结肠癌发病原因简述
二、环境化学物质诱发的结肠癌
三、饮食因素诱发的结肠癌
四、细菌酶诱发的结肠癌
第三节乳酸菌调控机体免疫功能
一、乳酸菌对非特异性免疫功能的影响
二、乳酸菌对特异性免疫功能的影响
三、乳酸菌激活机体的抗肿瘤免疫
第二章乳酸菌抗结肠癌功能研究进展
第一节乳酸菌抗结肠癌作用的机理
一、乳酸菌降低食源性致癌物质的毒性
二、乳酸菌抑制癌细胞生长及诱导癌细胞凋亡
三、乳酸菌对潜在致癌物质致癌作用的阻断
四、乳酸菌对饮食诱发结肠癌作用的阻断
第二节乳酸菌不同菌体成分抗结肠癌作用机理
一、乳酸菌的菌体细胞抗结肠癌作用研究
二、乳酸菌的菌体细胞壁抗结肠癌作用研究
三、乳酸菌的菌体细胞质抗结肠癌作用研究
四、乳酸菌的菌体代谢产物抗结肠癌作用研究
第三节乳酸菌与线粒体凋亡信号途径
一、活性氧族
二、线粒体凋亡途径
第四节国内开展的课题相关研究
第三章乳酸菌抗肿瘤研究技术方法
第一节乳酸菌抗肿瘤研究设施、材料
一、实验仪器与设备
二、实验所用试剂与药品
三、实验所用菌株与细胞
四、实验用培养液
第二节乳酸菌抗肿瘤研究检测方法
一、对结肠癌细胞增殖抑制能力的测定
二、乳酸菌对人肠道上皮细胞黏附性能的测定
三、乳酸菌对酸耐受能力的测定
四、乳酸菌对胆盐耐受能力的测定
五、乳酸菌16S rDNA 的鉴定
六、蛋白浓度的测定
七、乳酸菌肽聚糖分子量的检测
八、乳酸菌肽聚糖氨基酸组成分析
九、乳酸菌菌体和肽聚糖的形态学观察
十、HT-29细胞毒性的测定
十一、HT-29细胞形态学观察
十二、HT-29细胞DNA损伤的测定
十三、HT-29细胞凋亡与坏死的测定
十四、HT-29细胞周期的测定
十五、HT-29细胞线粒体膜电位的测定
十六、HT-29细胞ROS的检测
十七、HT-29细胞线粒体和胞浆中细胞色素C的检测
十八、HT-29细胞总RNA的提取
十九、体外反转录合成及RT-PCR反应
二十、HT-29细胞总蛋白提取与蛋白含量的测定
二十一、HT-29细胞总蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
二十二、Western blot分析
第四章乳酸菌抗肿瘤核心技术研究
一、抗结肠癌功能乳酸菌菌株的体外筛选
二、抗结肠癌功能乳酸菌菌体成分的筛选
三、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞的抑制作用
四、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡途径的研究
五、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡线粒体途径研究
六、数据处理及统计分析
第五章抗结肠癌功能乳酸菌的筛选
第一节引言
第二节基于抑制HT-29细胞增殖能力筛选抗结肠癌乳酸菌
第三节基于乳酸菌的益生功能筛选抗结肠癌功能乳酸菌
一、乳酸菌黏附于肠上皮细胞的能力
二、乳酸菌对模拟胃液的耐受能力
三、乳酸菌对模拟小肠液的耐受能力
第四节乳酸菌菌种鉴定
第五节本章小结
第六章抗结肠癌功能乳酸菌菌体成分的筛选
第一节引言
第二节乳酸菌细胞壁和细胞质的提取及蛋白含量测定
一、考马斯亮蓝G-250标准曲线
二、乳酸菌细胞壁和细胞质蛋白质浓度计算
第三节基于抑制HT-29细胞增殖能力筛选乳酸菌菌体成分一、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞增殖的抑制
二、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞的毒性作用
第四节基于诱导HT-29细胞DNA损伤筛选乳酸菌菌体成分
一、单细胞凝胶电泳实验
二、琼脂糖凝胶电泳实验
第五节基于诱导HT-29细胞凋亡筛选乳酸菌菌体成分
一、乳酸菌细胞壁和细胞质诱导HT-29细胞的凋亡
二、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞膜电位的影响
三、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞周期的影响
四、乳酸菌细胞壁和细胞质对HT-29细胞形态学的影响
第六节乳酸菌细胞壁对正常细胞毒性影响
第七节本章小结
第七章乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞抑制作用
第一节引言
第二节乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞增殖的抑制
一、5-氟尿嘧啶对HT-29的毒性作用
二、MTT实验
三、台盼蓝染色实验
第三节乳酸菌肽聚糖理化性质分析
一、乳酸菌肽聚糖蛋白含量的测定
二、乳酸菌肽聚糖分子量的测定
三、乳酸菌肽聚糖氨基酸组成及含量
四、扫描电镜观察乳酸菌肽聚糖形态
五、透射电镜观察乳酸菌肽聚糖形态
第四节乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡
一、HE染色
二、Hoechst荧光染色
三、透射电镜观察乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞线粒体的损伤
四、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞周期的影响
五、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡
第五节乳酸菌肽聚糖对正常细胞毒性影响
第六节本章小结
第八章肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡途径研究
第一节引言
第二节乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞凋亡相关基因的影响
一、HT-29细胞总RNA的提取
二、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞凋亡相关基因的影响
三、乳酸菌肽聚糖对HT-29细胞Cyto-C基因表达的影响
第三节乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡机制研究
一、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞线粒体膜电位的损失
二、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞ROS的堆积
三、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞线粒体Cyto-C的释放
四、乳酸菌肽聚糖诱导HT-29细胞凋亡相关蛋白的变化
第四节本章小结
总结
展望
参考文献
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| 內容試閱：
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前言结肠癌是威胁人类健康和生命的恶性疾病，是世界上第三大癌症，其发病率和死亡率均很高。结肠癌多数发生在大肠底部，在直肠内或者附近的地方。结肠癌的致癌因素有很多，如遗传因素、环境因素和饮食因素等，这些因素通常是协同作用而引发癌症，但是其中最重要的诱发因素是饮食因素。高脂肪、高蛋白和低纤维的饮食导致人结肠癌的发病率上升，而摄入乳酸菌对结肠癌有预防和抑制作用。研究显示，人体摄入乳酸菌对结肠癌有一定的抑制作用。乳酸杆菌和双歧杆菌作为乳酸菌的重要成员广泛存在于人体内。两者不仅是人体生理性细菌，维持宿主肠道的健康，还一定程度上抑制癌症的发生。
本专著以本实验室人员从中国西部地区传统发酵食品及婴儿、成人粪便中分离出的乳酸菌为供试菌株，以标准菌株鼠李糖乳酸杆菌（Lactobacillus rhamnosus）GG（ATCC 43121，USA）为阳性对照菌株，筛选出具有显著抑制人结肠癌HT-29细胞增殖能力的乳酸菌，并深入探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的机理。
著者2019年1月
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