新書推薦：
《
中国震撼
》
售價：NT$
403.0
《
以讹传讹：错误信息如何传播
》
售價：NT$
437.0
《
大学问·生活中的意义
》
售價：NT$
442.0
《
待客之道：7-Eleven如何把客户体验做到极致
》
售價：NT$
386.0
《
空腹力（诺贝尔奖得主研究成果！科学空腹，让身体脱胎换骨！）
》
售價：NT$
325.0
《
邓小平视察纪实
》
售價：NT$
549.0
《
财商养成第一课
》
售價：NT$
325.0
《
腐蚀工程手册（原著第三版）
》
售價：NT$
2229.0
|
| 編輯推薦： |
|
《病毒转基因技术原理》不仅可供医学研究生使用，还可作为相关专业的教师、科研和制药等行业工作者的参考书。
|
| 內容簡介： |
|
《病毒转基因技术原理》由来自全国8所高等院校和科研院所的专家学者合作编写完成。重点介绍了常用病毒的转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用现状。力图结合对病毒基本生物学特性和新进展的介绍，讲透病毒转基因技术的基本问题，突出各种不同系统的优点，探讨了存在的问题和发展趋势。
|
| 目錄：
|
目录
前言
第一章转基因技术概述1
一、常见的基因转移方式1
二、基因转移入真核细胞的方法2
复习思考题10
参考文献10
第二章腺病毒11
第一节腺病毒简介11
一、生物学特性11
二、致病性与免疫性14
三、微生物学检测方法14
第二节腺病毒载体转基因技术原理15
一、腺病毒载体的发展15
二、腺病毒载体的构建策略17
第三节腺病毒载体的医学应用19
一、腺病毒载体介导的基因治疗19
二、基于腺病毒载体的新型候选疫苗21
三、展望24
复习思考题25
参考文献25
第三章腺相关病毒27
第一节腺相关病毒简介27
一、生物学特性27
二、致病性与免疫性33
第二节腺相关病毒载体转基因技术原理33
一、蛋白质表达型腺相关病毒载体33
二、基因打靶型腺相关病毒载体38
三、rAAV的纯化和定量38
第三节腺相关病毒载体的医学应用39
一、血友病B40
二、囊性纤维化40
三、视网膜疾病40
四、帕金森病和阿尔茨海默病40
五、肿瘤41
六、其他疾病41
七、基因打靶41
八、展望41
复习思考题42
参考文献42
第四章Ⅰ型单纯疱疹病毒44
第一节Ⅰ型单纯疱疹病毒简介45
一、生物学特性45
二、致病性与免疫性47
三、微生物学检测方法47
四、防治原则48
第二节HSV-1载体转基因技术原理48
一、扩增子载体49
二、复制缺陷型载体50
三、复制减毒型载体51
四、重组HSV-1病毒粒子的纯化和定量51
第三节HSV-1载体的医学应用52
一、溶瘤性治疗52
二、疫苗开发的应用54
三、治疗慢性疼痛55
四、展望56
复习思考题57
参考文献57
第五章莫洛尼氏鼠白血病病毒60
第一节莫洛尼氏鼠白血病病毒简介60
一、生物学特性60
二、致病性与免疫性63
三、临床体征65
四、诊断与防治65
第二节莫洛尼氏鼠白血病病毒载体转基因技术原理66
一、构建原理66
二、逆转录病毒载体结构68
三、包装69
四、重组病毒制备70
第三节莫洛尼氏鼠白血病病毒载体的医学应用71
一、制备转基因动物71
二、RNA干扰71
三、肿瘤治疗72
四、基因治疗72
复习思考题72
参考文献72
第六章慢病毒75
第一节HIV-1病毒简介75
一、生物学特性75
二、致病性与免疫性78
三、微生物学检测方法78
第二节慢病毒载体转基因技术原理79
一、以HIV-1为基础的慢病毒载体组成79
二、慢病毒载体创新设计的安全性考虑83
三、重组慢病毒的产生84
四、慢病毒载体制备的浓缩方法85
第三节慢病毒载体的医学应用87
一、功能基因组学87
二、转基因动物87
三、细胞工程88
四、基因治疗88
复习思考题89
参考文献89
第七章痘病毒92
第一节痘病毒简介92
一、生物学特性92
二、致病性与免疫性94
三、微生物学检测方法97
四、治疗与预防97
第二节痘病毒载体转基因技术原理98
一、常用的痘病毒载体98
二、构建原理98
三、重组痘病毒鉴定、纯化和定量100
四、重组痘病毒的安全操作101
第三节痘病毒载体的医学应用102
一、新一代抗天花疫苗疫苗载体102
二、预防传染病104
三、肿瘤基因治疗105
四、展望106
复习思考题107
参考文献107
第八章杆状病毒109
第一节杆状病毒简介109
一、分类109
二、病毒结构110
三、病毒复制113
第二节杆状病毒载体转基因技术原理114
一、杆状病毒表达系统的基本特征114
二、杆状病毒表达系统基本原理及构建原则115
三、杆状病毒表达系统重要技术要点116
四、杆状病毒表达系统的改进120
第三节杆状病毒载体的医学应用122
一、表达外源蛋白122
二、杆状病毒表面展示122
三、基因治疗122
四、抗体与疫苗123
五、基因工程病毒杀虫剂124
六、展望125
复习思考题125
参考文献125
第九章甲病毒127
第一节甲病毒简介127
一、生物学特性127
二、致病性128
第二节甲病毒载体转基因技术原理129
一、甲病毒表达载体的构建129
二、甲病毒表达载体的转染130
第三节甲病毒载体的医学应用131
一、蛋白质表达131
二、肿瘤疫苗与肿瘤治疗132
三、靶向性基因治疗134
四、展望135
复习思考题135
参考文献135
第十章仙台病毒137
第一节仙台病毒简介137
一、生物学特性137
二、致病性与免疫性139
三、微生物学检测方法139
第二节仙台病毒载体转基因技术原理139
一、构建原理140
二、发展方向141
第三节仙台病毒载体的医学应用142
一、减毒活疫苗142
二、治疗肢端缺血142
三、治疗肿瘤143
四、细胞核重编程诱导多能干细胞143
五、其他应用144
复习思考题144
参考文献144
第十一章生物安全146
第一节生物安全实验室与转基因生物安全146
一、生物安全实验室146
二、病原微生物分类147
三、实验室转基因技术生物安全150
第二节基因治疗生物安全151
一、载体安全性152
二、表达产物安全性154
三、关于基因治疗和病毒载体活疫苗生物安全的要求155
复习思考题155
参考文献155
第十二章临床试验伦理157
一、基因治疗的伦理学问题157
二、病毒载体疫苗的伦理学问题159
复习思考题161
参考文献161
附录常用的网址163
|
| 內容試閱：
|
第一章转基因技术概述
在自然界，生命的种类繁多且复杂。尽管生命的遗传性状在不同种类或同种不同个体间是有差异的，但相对稳定。在特定的条件下，遗传性状可因突变、基因转移（genetransfer）等而发生不同程度的改变。基因转移现象在自然界的生物体中非常常见。在原核细胞型微生物，基因的转移常采用转化、接合、转导、溶源性转换和原生质体融合等方式进行，可赋予受体生物新的生物学性状，如形态结构、耐药性、毒力和抗原性等的改变。而在非细胞型微生物，如病毒，可发生病毒基因组之间的重组和重配，或基因产物的互补和表型混合等；此外，部分肿瘤相关病毒的基因组可以整合到病毒感染的宿主细胞染色体中，造成宿主细胞基因组发生变异，甚至恶性转化。转基因技术，就是基于自然界中常见的基因转移现象，人为地加以利用，用于不同生命体之间基因转移，尤其是将外源基因转移入真核细胞，用以研究生命科学的基本现象和机制、基因工程产品制备、基因治疗、疾病预防和动物模型制备等，为人类的健康事业做出贡献。
一、常见的基因转移方式
（一）转化
早在1928年，Frederick在研究肺炎链球菌时，昀先报道了细菌的转化（transformation）现象。将有荚膜的、菌落呈光滑（S）型的Ⅲ型肺炎链球菌注射至小鼠体内，小鼠死亡，从死鼠血中可分离到Ⅲ型肺炎链球菌。将无荚膜的、菌落呈粗糙（R）型的Ⅱ型肺炎链球菌，或将ⅢS型菌加热杀死后再注射小鼠，则小鼠存活。但如将热杀死的ⅢS型菌与活的ⅡR型菌混合在一起注射小鼠，则小鼠死亡，并从死鼠血中分离出活的ⅢS型菌。这表明活的ⅡR型菌从死的ⅢS型菌中获得了产生ⅢS型菌荚膜的遗传物质，使活的ⅡR型菌转化为ⅢS型菌。1944年，Avery等用提取的ⅢS型菌的DNA片段代替热杀死的ⅢS型菌，与活的ⅡR型菌一起注射小鼠，仍导致小鼠死亡，且从死鼠血中分离到ⅢS型菌。终于证实引起ⅡR型菌转化的物质是ⅢS型菌的DNA。这就是著名的小鼠体内肺炎链球菌的转化实验。
现在，转化因此而被定义为：受体菌直接摄取供体菌游离的DNA片段，并将其整合到自己菌体基因中去，从而使受体菌获得供体菌新的遗传性状的过程。转化可以分为自然转化和人工转化两种。自然转化强调的是细菌只要处于感受态（competence）这一特殊的生理状态，即可摄取外源的线性染色体DNA分子和质粒。感受态的出现时间和持续时间因菌种而异。除肺炎链球菌外，其他细菌如流感嗜血杆菌、葡萄球菌和芽孢杆菌等均具有自然转化的能力。人工转化则是通过人为的方法，如低温CaCl2法诱导细菌处于感受态，使细菌具有摄取DNA的能力，或电穿孔法人为地将DNA导入菌体内，为不具有自然转化能力的很多细菌提供了一条获取外源DNA的途径，并且也是目前基因工程的基础技术之一。
（二）转导
1951年，Joshua和Norton发现了噬菌体介导的基因转移方式——转导（transduction）。用两株具不同的多重营养缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌混合培养后，基本培养基上长出原养型菌落，证实了该菌中存在重组现象。继续用Davis的“U”形管实验证实这一过程是否需要细胞间的直接接触。“U”形管中间隔有滤板，只允许培养基通过而细菌不能通过。其两臂装入完全培养基，将两株营养缺陷型菌株分别接种到“U”形管两臂进行培养后，在供体和受体细菌不接触的情况下，同样出现原养型细菌。表明这一重组过程并不需要细菌的直接接触。仔细检查后发现所用的沙门氏菌LT22A是携带P22噬菌体的溶源性细菌，另一株是非溶源性细菌，因此可透过“U”形管滤板的应该是P22噬菌体并进行着基因的传递。
现在，转导被定义为以温和噬菌体为媒介，将供体菌的DNA片段转移到受体菌内，使受体菌获得新的遗传性状的过程。转导在革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌均可发生。依据噬菌体和宿主菌关系，可把噬菌体分为毒性噬菌体和温和噬菌体。只有温和噬菌体能介导细菌的转导。根据DNA片段涉及的范围，转导可分为普遍性转导和局限性转导两种。普遍性转导是指噬菌体可以转导供体菌染色体的任何部分到受体菌中；而局限性转导是指噬菌体只能携带前噬菌体整合在染色体两侧的基因片段到受体菌中。
（三）转染
通常，感染（infection）被定义为病原体通过自然的途径进入动物或人体，突破宿主的防御机制并引起不同程度的病理过程。在感染涉及的病原体中，病毒是非常具有特征性的一类病原体，属于非细胞型微生物，在自然界的分布非常广泛，可在人、动物、植物、昆虫、真菌和原核细胞型微生物中寄居并引起感染。病毒体积微小，结构非常简单，仅含一种类型的核酸，因此必须在活细胞内寄生以完成其复制周期。利用病毒专一性活细胞寄生及部分病毒整合感染的特点，对病毒的基因组进行分子遗传学改造，设计出基因工程病毒载体。这种利用病毒载体将外源基因转移入真核细胞的过程称转染（transfection），以便与病毒的自然感染过程相区别（图1-1）。近年来，转染的广义概念是指外源基因通过非病毒载体转基因技术（物理、化学方法）或病毒载体转基因技术的方法进入真核细胞的过程。
二、基因转移入真核细胞的方法
（一）基因转移入真核细胞的影响因素
原核生物如细菌，为了防止外源DNA的入侵，其体内的限制性内切核酸酶会将外源DNA水解成不同的片段，而同时对自己的核酸相应的酶切位点进行甲基化修饰，保护自己的基因不受自己酶的破坏，这就是细菌的限制-修饰系统（restriction-modificationsystem）。如果是质粒参与的基因转移，依据质粒复制时对宿主的依赖程度，可分为窄宿主谱质粒和宽宿主谱质粒；两种以上的质粒在同一宿主中还存在相容性和不相容性的
图1-1野生型病毒的自然感染、病毒载体转染和质粒经化学法介导的转染
问题，这些因素会影响质粒在宿主菌中的稳定性。外源基因进入受体菌，必须依赖RecA蛋白与受体细菌同源序列之间发生同源重组；或不依赖RecA蛋白和同源序列发生非同源重组，从而让受体菌获得新的遗传性状。
外源基因进入真核细胞的影响因素与上述原核生物有显著差别。真核细胞具有不同的膜样结构，如细胞膜将细胞与外环境隔离开来，只允许特定的物质进行膜内外的交换；细胞核膜将细胞核和细胞内环境隔离开来；细胞器膜将细胞内环境的不同功能空间隔离开来。因为外源基因的化学性质是DNA，为大分子质量的物质，并且对核酸酶非常敏感。外源基因进入真核细胞，要突破三大障碍因素。首先是必须到达细胞膜的表面，其次是如何突破细胞膜进入细胞质，昀后是如何进入细胞核并启动外源基因的表达。理想的转基因技术方法必然包括以下几个方面：能够保护外源基因不被核酸酶降解、能输送外源基因到达细胞膜表面、有利于外源基因跨过细胞膜并促进其进入细胞核。
（二）外源基因转移入真核细胞的类型和方法
外源基因进入真核细胞的类型包括质粒型载体和病毒颗粒型载体两类，后者即病毒介导的转基因技术，可分为假型病毒载体和重组型病毒载体两种。
质粒型载体是将外源基因克隆入含有真核细胞（病毒）复制子的真核细胞表达质粒，既可在大肠杆菌中传代，也能在允许真核细胞中以染色体外质粒的形式复制和表达外源基因，但不会产生感染性病毒颗粒。对于这种类型的载体进入真核细胞，常用物理（表1-1）和化学的方法（表1-2）。
表1-1介导基因转移常用的物理方法
物理方法原理材料DNA用量优点缺点
传统的针头注射外力注射器高便宜、简单，便于效率比较低应用于临床
显微注射细胞内注射DNA显微镜和显微注低适用于细胞水平步骤烦琐，不适用射针的研究，不易降解于临床，专业技术要求高
粒子轰击高压气体使微小不同的加速装置低对靶组织有很高需要很多的设备和的载体加速的效率步骤
电穿孔电脉冲 电穿孔仪低高转染效率未得到广泛认可
流体动力学流体动力学的力量特殊的注射器中等简单易于使用、转组织局限性染效率高
包裹微球胶囊化的微球包中等控制下投递和释放制备的质量控制裹DNA
超声超声仪超声超声仪中等偏低安全、组织损伤小技术不断发展、经验有限
表1-2介导基因转移常用的化学方法
公司 产品组成
Amersham-BiosciencesCellPhecttransfectionKitCaPO4orDEAE-DextranBio-RadLabsCytoFecteneTransfectionReagentCationiclipidBDBiosciences-CLOMTECHCLONfectinTMCationiclipid
CalPhosTMCalciumphosphateCPGInc.GeneLimoTMTransfectionReagentPlusPolycationiclipids+lipidcompoundGeneLimoTMTransfectionReagentPolycationiclipids+lipidcompoundSuper
GeneTherapySystems GenePORTERTMDOPE+ProprietarycompoundsGenePORTERTM2ProprietarymaterialBoosterExpressTMReagentKitProprietarymaterialPGeneGripTMVectorTransfectionGenePORTER+plasmidvector
SystemsGlenResearchCytofectinGSCationiclipid
续表
公司产品组成
InvitrogenLipofectAMINE2000TMReagentPolycationiclipid
LipofectAMINEPLUSTMReagentPolycationiclipid（DOSPA：DOPE）
LipofECTIN.ReagentCationiclipid（DOSPA：DOPE）
TransfectionReagentOptimizationSystemLipofectAMINEPLUSTM+Lipofectin.+CellFectin.+DMRIE
CellFectin.ReagentCationiclipopolyamine
OligofectAMINETMReagentProprietary
InvivoGenLipoVecTMCationicphosphonolipids
LipoGenTMNon-liposomallipid
MBIFermentasExGen500Cationicpolymer
ExGen500invivodeliveryagentCationicpolymer
NovagenGeneJuiceTMTransfectionReagentProprietarypolyamine
PanVeraCorporationTransⅡ.-TKOReagentsPolyamine.
TransⅡ.-LT-1andLT-2Polyamine.
TransⅡ.ExpressTransfectionReagentPolyamine.
TransⅡ.PanPackPolyamine+cationiclipid.
TransⅡ.-InsectaCationiclipid.
TransⅡ.-293Polyamine.
TransⅡ.-KeratinocytePolyamine
PromegaTransFASTTMTransfectionReagentCationiclipid
TfxTM-10，-20，and-50ReagentsCationiclipid
TfxTMReagentsTransfectionTrioCationiclipid
Transfectam.ReagentCationiclipid
ProFection.MammalianTransfectionDEAE-Destranorcalciumphosphate
System
QbiogeneGeneSHUTTLETM-20and-40ReagentsPolycationiclipids
InvivoGeneSHUTTLETMReagentLiposome-mediatedDOTAP：Chol.
DuoFectTMReage
|
|
購物車/收銀台(
0
) | 在線留言板
| 付款方式
| 聯絡我們
| 運費計算
| 幫助中心 |
加入書簽
HOME
新書上架
